Erros no Processamento e Leitura dos Cartões em Gel – Centrifugação, Centrifugadora e Manutenção
Neste artigo, falaremos de dois possíveis erros: o ato de centrifugar os cartões (método) e a centrifugadora (máquina).
Antes das centrifugadoras automatizadas, a centrifugação de amostras era um processo manual, onde o operador girava uma manivela para centrifugar duas a quatro amostras. A adição da centrifugadora automatizada representou uma grande avanço na rotina laboratorial, tanto por permitir a centrifugação de diversas amostras de uma única vez enquanto o operador continua a trabalhar, como também pela possibilidade de dinamizar o processo, usando tempos diferentes ou diferenciando a intensidade da centrifugação (leve e pesada) para obter diferentes resultados.
Exemplos de centrífugas manuais, imagens retiradas da internet do site da Medical Expo
Qual a velocidade adequada de centrifugação? Depende do processo, do tamanho do equipamento, da rede elétrica local, etc. Todos eles devem estar esclarecidos no POP da área, aprovados pelo supervisor técnico, com uma cópia disposta para livre consulta dos colaboradores. Ter uma centrífuga com capacidade de programação é de enorme ajuda neste momento, pois o colaborador não precisa digitar quando usar o item.
“Art. 10. Os profissionais responsáveis devem assegurar que todos os procedimentos técnicos, administrativos, de gerenciamento de resíduos, de limpeza e desinfecção sejam executados em conformidade com os preceitos legais e critérios técnicos cientificamente comprovados, os quais devem estar descritos em procedimentos operacionais padrão (POP) e documentados nos registros dos respectivos setores de atividades.”
(Artigo 10° da RDC 34/2014)¹
Conforme mencionado nos temas anteriores, o sucesso de uma reação de hemaglutinação nos cartões em gel depende da capacidade de antígeno e anticorpo se ligarem, e formarem um aglutinado de células, que não vencem a resistência do gel durante a centrifugação.
Para uma reação em tubo, a velocidade recomendada pelo FDA² usando produtos bolsas de empresas especificas era de 3400 rpm por 10 segundos, ou 60 segundos a 1000 rpm. Excessiva centrifugação causaria um agregado difícil de ser ressuspendido caracterizando um falso positivo, e centrifugação insuficiente ou agitação excessiva seriam responsáveis por um resultado falso negativo.
Os mesmos cuidados apontados em tubos são aplicáveis para os cartões em gel. Centrifugação excessiva podem ser apontadas como responsáveis pelos resultados falso negativos, e centrifugação insuficiente podem ser responsáveis por resultados falso positivos.
Cabe ao usuário ter atenção ao escolher a programação na centrifugadora, ou digitar os parâmetros com o POP em mãos para evitar erros.
A equipe de qualidade e validação também precisam ter atenção aos parâmetros do equipamento, e o local de uso da máquina. A frequência de um equipamento é dada pelo número de vezes que um evento completo ocorre (voltas, ciclos, etc) em um determinado tempo, e as frequências de trabalho (50Hz-60Hz) são diferentes em vários países e até mesmo entre regiões de um mesmo país, ter um equipamento com frequência de trabalho 50Hz operando em uma rede de 60Hz pode ter uma rotação real das amostras muito mais alta do que o que foi programado no visor.6 O oposto também é aplicável, ter um equipamento de frequência 60Hz operando em rede de 50Hz está funcionando “abaixo de sua capacidade”, logo, pode precisar permanecer em centrifugação por mais tempo ou em uma frequência maior do que a habitual.
ATENÇÃO
Outro ponto de atenção que também pode ser atribuído ao ato de centrifugar é o aquecimento. O atrito com o ar no processo de centrifugação pode aquecer o recipiente a temperaturas superiores a 40°C, e consequentemente, a temperatura da amostra.3-6
Especialmente em imunohematologia, existem processos onde o operador intencionalmente escolhe realizar um processo a frio (20°C) ou quente (37°C) porque isso impacta um diagnóstico. Se for utilizado uma centrífuga SEM refrigeração, considerar se um possível aumento de temperatura impacta no teste realizado, e vice versa, se for utilizado uma centrífuga COM refrigeração, considerar se o declínio da temperatura impacta no diagnóstico do teste realizado.
Centrífugas demandam muitos cuidados?
Enquanto o processo manual era limitado pela diferentes forças braçais dos operadores, lubrificação das engrenagens e volume, a centrifugação automatizada permitiu maior controle da velocidade, tempos e volumes, porém, também lançou maior atenção sobre os cuidados com o item.
Centrífugas precisam ter um bom tempo e boa velocidade de desaceleração para evitar paradas bruscas e perder todo o trabalho da centrifugação porque as amostras foram agitadas. Precisam estar balanceadas para que a diferença de peso não cause agitações durante o processo de centrifugação e não diminua a vida útil do rotor. Limpeza também é um fator determinante na manutenção do produto. Abaixo, pode-se encontrar uma breve lista com todos os cuidados necessários8-10:
- Local de trabalho da centrífuga não pode ser uma região de forte incidência solar, ou grande amplitude térmica. Se possível, o material deve ficar armazenado longe do sol, em baixa umidade, e longe de poeira;
- Em locais que mais de uma centrífuga é necessária na rotina, ambas devem estar distantes ao menos 1 metro entre si;
- Limpeza externa e interna. Desmonte a centrífuga (cestos e rotor) para fazer a limpeza, especialmente se houve quebra de filtros, lacres ou sangue derramado. Caso tenha centrífugas refrigeradas, limpe a camada superficial de gelo e água derretida;
- Busque por sinais de corrosão ou desgaste nas partes e peças;
- Deixe-a aberta periodicamente para dissipação da condensação, ou resfriamento, caso o uso da mesma seja intenso;
- Teste o encaixe da grande no rotor antes do uso. Existem opções no mercado que possibilitam o uso da mesma centrífuga para centrifugar cartões ou tubos, apenas trocando a grade de encaixe;
- Pese as amostras e posicione as de peso similar em lados opostos. Tenha pedaços de bolsas cortados em diferentes tamanhos para balancear diferenças de gramas, pequenos pesos, bolsas extras cheias com soro fisiológico, etc. Algumas centrífugas já possuem um sensor e bloqueiam o acionamento quando há desbalanço;
- Disponha as amostras de forma simétrica. Nunca coloque apenas uma amostra, ou um número ímpar de amostras para rotação, use tubos com soro fisiológico ou cartões extras para balancear se necessário;
- Mantenha todos os demais cestos do rotor, mesmo que apenas dois sejam utilizados no momento.
*Letícia Farias Borges – Engenheira de Produção e pós graduada em Hemoterapia.
BIBLIOGRAFIA
1 – ANVISA. AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA. Resolução da diretoria colegiada- RDC nº 34, de 11 de Junho de 2014. Disponível em: http://portal.anvisa.gov.br/documents/10181/2867975/%281%29RDC_34_2014_COMP.pdf/ddd1d629-50a5-4c5b-a3e0-db9ab782f44a. Acessado em: 24/07/2020.
2 – Food and Drug Administration. Appendix 1 (2018). Retrieved from: https://www.fda.gov/media/111331/download Acessado em 21/08/2020
3 – SPLABOR Equipamentos para Laboratórios. “Centrífugas para Uso em Laboratório – Saiba mais”. Disponível em: http://www.splabor.com.br/blog/centrifuga-2/centrifugas-de-bancada-e-refrigerada/ Acessado em 08/09/2020
4 – SPLABOR Equipamentos para Laboratórios. “Centrífugas de Laboratório – 5 Dicas para a escolha do modelo ideal”. Disponível em: https://www.splabor.com.br/blog/centrifuga-2/centrifuga-para-laboratorio-05-dicas-para-a-escolha-do-modelo-ideal/ Acessado em 08/09/2020
5 – Eppendorf. “Eppendorf Tubes – Instructions for Use”. Disponível em: https://www.eppendorf.com/product-media/doc/en/234161/Consumables_Instructions-use_Tubes-Tubes-50-mL.pdf Acessado em 09/09/2020
6 – SIGMA. “Sample Temperature during High Throughput Ambient Temperature Centrifugation using Sigma 4-5L”. Disponível em: https://www.sigma-zentrifugen.de/fileadmin/user_upload/sigma/produkte/pdf/White_paper__4-5L-Temperature_during_high_throughput_centrifugation.pdf Acessado em 09/09/2020
7 – Refrigeration Club. “Tensão elétrica e frequência: Variações” Disponível em: https://refrigerationclub.com/pt-br/tensao-e-frequencia-variacoes/#:~:text=A%20diferen%C3%A7a%20entre%2050Hz%20e,em%20que%20o%20compressor%20gira.&text=Por%20outro%20lado%2C%20se%20o,demais%2C%20o%20compressor%20perder%C3%A1%20capacidade. Acessado em 10/09/2020
8 – DIAPRO. “Across Card Centrifuge – Service Manual”. Disponível em: https://diapro.com.tr/assets/product/ACROSS_CARD_CENTRIFUGE__MAINTENANCE_MANUAL_EN.pdf Acessado em 09/09/2020
9 – BIO RAD. “Bio Rad IH-Complete | IH Manual”. Disponível em: https://info.bio-rad.com/ih-manual.html Acessado em 09/09/2020.
10 – Eppendorf. “Maintenance of Centrifuges”. Disponível em: https://www.eppendorf.com/uploads/media/epservices-maintenance-of-centrifuges-poster_17.pdf Acessado em 09/09/2020.