Erros no Processamento e Leitura dos Cartões em Gel – Preparo das Soluções

Em um cartão em gel, a leitura como positiva ou negativa depende que ocorra uma reação de hemaglutinação, ou seja, depende que ocorra uma reação de ligação entre os antígenos presentes na hemácia, e os anticorpos presentes no soro. Quando essa reação ocorre, os anticorpos se prendem as hemácias fazendo com que elas se aglutinem, formando uma enorme rede ou bloco. Durante a centrifugação essa rede de hemácias não consegue vencer a resistência do gel caracterizando o resultado positivo.

O sucesso desta reação contudo depende da PROPORÇÃO correta do soro e do reagente. Uma oferta exagerada de anticorpos (soro em excesso) provoca o efeito prozona e nenhuma aglutinação ocorre caracterizando um falso negativo, de forma similar, uma oferta exagerada de antígenos faz com que os anticorpos sejam insuficientes para diminuir o potencial zeta (efeito de repulsão entre hemácias que as mantém distantes) e as aproximar o suficiente para causar aglutinação, mais uma vez caracterizando um falso negativo.^4-5

Conhecer e entender o princípio e a lógica por trás das técnicas utilizadas permite ao colaborador fazer uso de pequenas modificações nas proporções da rotina padrão, que vão facilitar a leitura ou identificação do que ele precisa. Mas o princípio e a lógica do que ele está modificando precisam estar muito bem entendidos e claros! Caso contrário, ao invés de potencializar uma reação ele pode obter o efeito oposto (diluição), ou concentrar tanto uma parte da reação em detrimento de outra que obterá um resultado falso negativo (efeito Prozona ou não diminuição do potencial zeta).

Como assim?

O LISS é uma solução que diminui o potencial zeta (repulsão iônica) entre as hemácias, diminuindo a distância entre elas se potencializa o efeito de agregação e de ligação dos anticorpos do soro e antígenos das hemácias^1-2, criando a tão desejada rede de hemácias que caracteriza o resultado positivo. A “solução padrão” em tubo é diluir uma dose de hemácias em LISS, e pipetar uma porção desta solução em uma dose de soro do paciente com anticorpos. ³

Suponha que exista uma amostra de um paciente, e que o colaborador desconfia que existem anticorpos no soro, porém, em baixo título (baixa quantidade). Se uma transfusão fosse realizada, apesar desses anticorpos terem um baixo título eles já seriam capazes de causar uma reação transfusional, e a bolsa transfundida seria perdida. Logo, é necessário identificar se realmente existe um anticorpo, e qual seria ele. Como o colaborador poderia “modificar a fórmula padrão” para potencializar essa reação? Dobrando o volume de LISS?

O LISS é um meio de diluição. Se o colaborador dobrasse o volume de LISS para a mesma dosagem de hemácias (diluente) ele estaria oferecendo um ambiente com baixa força iônica mas com hemácias super diluídas para apresentar qualquer reação em contato com o soro. Se a intenção do indivíduo era potencializar a reação para compensar a baixa oferta de anticorpos no soro, ele deveria ter aumentado a quantidade de hemácias (diluente) na mesma porção de LISS (meio de diluição).

Esta técnica é utilizada para potencializar reações onde o título de anticorpos seria baixo (caso de pessoas idosas) ou para potencializar a reação de anticorpos anti-Jk^b ,cujo título é muito volátil, aumenta e declina rapidamente e está sujeito a efeito de dose². O raciocínio é de que aumentando a “oferta” de hemácias Jk^b positivas para reação com os anticorpos, a reação de hemaglutinação em baixa força iônica é potencializada.

No exemplo mencionado acima, o erro de lógica da pessoa foi supor que se ele dobrasse o volume do LÍQUIDO ele obteria o dobro de redução de força iônica, logo, as hemácias presentes ficariam mais unidas.

Além de erros de raciocínio, o preparo de algumas soluções também está sujeito a erros matemáticos. “Suspensão a 5%”;”pipetar 1 ml a 0,9%”,”pipetar 10 μl (microlitros) em 5 ml (mililitros)” são várias unidades de medida, e pequenos cálculos que quando somados ao cansaço, stress, desatenção, são passíveis de erros.

Pipetar duas gotas de hemácias no cartão ao invés de uma por exemplo, pode desequilibrar a reação no cartão ao ponto de gerar um falso negativo porque os anticorpos foram suficientes para produzir ligação, mas não o efeito de malha para resistir a centrifugação, ou uma dupla população, onde existem hemácias no topo (com reação) e fundo do poço (sem anticorpos suficientes para reagir).

*Letícia Farias Borges – Engenheira de Produção e pós graduada em Hemoterapia.

BIBLIOGRAFIA

1 – MINISTÉRIO DA SAÚDE. Secretaria de Gestão do Trabalho e da Educação na Saúde Departamento de Gestão da Educação na Saúde (2013). “Técnico em Hemoterapia”. Acessado em: 23/01/2021.

2 – Oliveira et al (2013) “Conceitos Básicos Aplicados em Imuno Hematologia”. Retrieved from:  http://www.epsjv.fiocruz.br/upload/Material/L226.pdf. Acessado em: 23/01/2021.

3 – HEMOAM. SOLUÇÃO DE BAIXA FORÇA IÔNICA PARA SUSPENSÃO DE ERITRÓCITOS “Uso em diagnóstico In vitro”. Retrieved from: http://www.hemoam.am.gov.br/pdf/liss.pdf (Acesso em 21/08/2020). Acessado em: 23/01/2021.

4 – Mayer, G. “Imunologia, Capítulo 7: Reações Antígeno-Anticorpo.”  Retrieved from: https://www.fcav.unesp.br/Home/departamentos/patologia/HELIOJOSEMONTASSIER/ed-7-interacoes-antigeno-anticorpo.pdf (Acesso em 22/09/2020). Acessado em: 23/01/2021.

5 – Rodrigues, D. “Imunohematologia”. Retrieved from: https://d3eaq9o21rgr1g.cloudfront.net/aula-temp/214451/00000000000/curso-45425-aula-00-v4.pdf?Expires=1600986054&Signature=mJKptAfWUMdHZcSgdHdyVTzaox1k3Dxzsb1bTvlw1VzVjZszTzmwttiU8O0GQkl3B0BTXqVYMoQRWWpheltJ8OI2E4bNQJrq-9dFH~7xKh8ILQmjsYcgI7IrxcWjocuW0etltxIDRLx8-gvdxpsmdRD3ZWjgRsotoUof~635HYoZRjaXZ9SeFepyoXmqPdz0scd3CD96XK1fdsPzLSuVZrrV6QLefOirn8Jshvt~tnQedAD8jdznskPfDIbPBVsOhxQAqrRyEkw0JRcwsa6zJXhXGw9~kv1YWG~LWGT6fMNcIv45x1-cMqwryv7jz8QnmIsR-kAOrZTrfo6uZXnWAw__&Key-Pair-Id=APKAIMR3QKSK2UDRJITQ. Acessado em: 23/01/2021.